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显微镜常见问题

显微镜的观察方式

      显微镜常见问题

一.明视野观察
? ? ? ?明视野镜检,广泛应用于病理、检验,用于观察被染色的切片,所有显微镜均能完成此功能。

二.暗视野观察
? ? ? ?暗视野实际是暗场照明发。它的特点和明视野不同,不直接观察到照明的光线,而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此,视场成为黑暗的背景,而被检物体则呈现明亮的象。
? ? ? ?暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象,微尘在强光直射通过的情况下,?#25628;?#19981;能观察,这?#19988;?#20026;强光绕射造成的。若把光线斜射它,由于光的反射,微粒似乎增大了体积,为?#25628;?#21487;见。
? ? ? ?m..m 暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光束?#19978;?#33267;上的通过被检物体,而是将光线改变途径,使其斜射向被检物体,使照明光线不直接进入物镜,利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。暗视野观察的分辨率远高于明视野观察,最高达0.02—0.004

二.暗视野观察
? ? ? ?暗视野实际是暗场照明发。它的特点和明视野不同,不直接观察到照明的光线,而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此,视场成为黑暗的背景,而被检物体则呈现明亮的象。
? ? ? ?暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象,微尘在强光直射通过的情况下,?#25628;?#19981;能观察,这?#19988;?#20026;强光绕射造成的。若把光线斜射它,由于光的反射,微粒似乎增大了体积,为?#25628;?#21487;见。
? ? ? ?m..m 暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光束?#19978;?#33267;上的通过被检物体,而是将光线改变途径,使其斜射向被检物体,使照明光线不直接进入物镜,利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。暗视野观察的分辨率远高于明视野观察,最高达0.02—0.004

三.相差镜检法
? ? ? ?在光学显微镜的发展过程中,相差镜检术的发明成功,是近代显微镜技术中的重要成就。我们知道,?#25628;?#21482;能区分光波的波长(颜色)和振幅(亮度),对于无色通明的生物标本,当光线通过时,波长和振幅变化不大,在明场观察时很难观察到标本.
? ? ? ?相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检,也就是有效地利用光的干涉现象,将?#25628;?#19981;可分辨的相位差变为可分辨的振幅差,即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察,因此相差镜检法广泛应用于倒置显微镜。

? ? ? ?相差显微镜的基本原理是,把透过标?#38236;?#21487;见光的光程差变成振幅差,从而提高了各种结构间的对比度,使各种结?#36129;涞们?#26224;可见。光线透过标本后发生折射,偏离了原来的光路,同时被延迟了1/4λ(波长),如果再增加或减少1/4λ,则光程差变为1/2λ,两束光?#29616;?#21518;干涉加强,振幅增大或减下,提高反差。在构造上,相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处:
? ?1. 环形光阑(annular diaphragm) 位于光?#20174;?#32858;光器之间,作用是使透过聚光器的光线形成空心光锥,焦聚到标本上。
? ?2. 相位板(annular phaseplate)在物镜中加了涂有氟化?#38236;?#30456;位板,可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。分为两种:
? ?1. A 相板:将直射光推迟1/4λ,两组光波?#29616;?#21518;光波相加,振幅加大,标本结构比周围介质更加变?#31890;?#24418;成亮反差(或称负反差)。
? ?2. B 相板:将衍射光推迟1/4λ,两组光线?#29616;?#21518;光波相减,振幅变小,形成暗反差(或称正反差),结构比周围介质更加变暗

四.微分干涉称镜检术
? ? ? ?微分干涉镜检术出现于60年代,它不仅能观察无色透明的物体,而且图象呈现出浮雕壮的立体感,并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点,观察效果更为?#26222;妗?br /> ? ? ? ?微分干涉称镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直?#20202;?#24230;相等,光束分别在距离很近的两点上通过被检物体,在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小,而不出现重影现象,使图象呈现出立体的三维感觉。

? ? ? ?DIC显微镜的物理原理完全不同于相差显微镜,技术设计要复杂得多。DIC利用的是偏振光,有四个特殊的光学组件:偏振器(polarizer)、DIC棱镜、DIC滑行器?#22270;?#20559;器(analyzer)。偏振器直接装在聚光系统的前面,使光线发生线性偏振。在聚光器中则安装了偌玛斯斯棱镜,即DIC棱镜,此棱镜可将一束光分解成偏振方向不同的两束光(x和y),二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微镜光轴?#21483;?#30340;方向。最初两束光相位一致,在穿过标本相邻的区域后,由于标?#38236;?#21402;度和折射?#20160;?#21516;,引起了两束光发生了光程差。在物镜的后焦面处安装?#35828;?#20108;个偌玛斯斯棱镜,即DIC滑行器,它把两束光波合并成一束。
这时两束光的偏振面(x和y)仍然存在。最后光束穿过第二个偏振装置,即检偏器。在光束形成目镜DIC影像之前,检偏器与偏光器的方向成直角。检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光,从而使二者发生干涉。x和y波的光程差决定着透光的多少。光程差值为0时,没有光穿过检偏器;光程差值等于波长一半时,穿过的光达到最大值。于是在灰色的背景上,标本结构呈现出亮暗差。为了使影像的反差达到最佳状态,可通过调节DIC滑行器的纵行微调来改变光程差,光程差可改变影像的亮度。调节DIC滑行器可?#36129;瓯镜?#32454;微结构呈现出正或负的?#38431;?#24418;象,通常是一侧?#31890;?#32780;另一侧暗,这便造成了标?#38236;?#20154;为三维立体感,类似大理石上的浮雕

五.偏光显微镜
偏光显微镜的特点
? ? ? ?偏光显微镜是鉴定物质细微结构光学性质的一种显微镜。凡具有双折射的物质,在偏光显微镜下就能分辨的清楚,?#27604;?#36825;些物质也可用染色发来进行观察,但有些则不可能,而必须利用偏光显微镜。
? ? ? ?偏光显微镜的特点,就是将普通改变为偏光进行镜检的方法,以鉴别某一物质是单折射(各向同行)或双折射性(各向异性)。双折射性是晶体的基本特性。因此,偏光显微镜?#36824;?#27867;地应用在矿物,化学等领域。在生物学和植物学也有应用。

六.浮雕相衬显微镜
? ?1975年,Robert Hoffman 博士发明
? ?2002年,专利到期,各显微镜厂家纷纷推出采用以自?#22909;?#20041;命名的RC技术产品
原理
? ?斜射光照射到标本产生折射、衍射,光线通过物镜光密度梯度调节器产生不同阴影,从而使透明标本表面产生明暗差异,增加观察对比度
特点
? ?提高未染色标?#38236;?#21487;见性和对比度;
? ?图象显示阴影或近似三维结构而不会产生光晕;
? ?可检测双折射物质(岩石切片、水晶、骨头) ;
? ?可检测玻璃,塑?#31995;?#22521;养皿中的细胞,器官和组织;
? ?聚光镜的工作距离可以设计的更长;
? ?RC物镜也可用于明场,暗场和荧光观察
七:荧光显微镜
? ? ? ?荧光镜检术是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体,使之受激发后而产生长波长的荧光,然后观察。

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